UD12. Técnicas análisis cromosómico

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UD12. BMC. Cápitulo 3 del libro, pag 66-122

APLICACIÓN DE TÉCNICAS DE ANÁLISIS CROMOSÓMICO

OBJETIVOS UNIDAD - Conocer las técnicas de preparación de los cromosomas para su estudio citogenético. - Saber cuáles son los métodos de tinción y bandeo cromosómicos. - Utilizar la nomenclatura cromosómica empleada en citogenética. - Identificar los patrones de las alteraciones cromosómicas más comunes. - Conocer la relación existente entre citogenética y cáncer

https://youtu.be/vpMD-F9jVAE

¿Qué estudia la citogenética?• Los cromosomas: estructura y función. • Una aplicación de los estudios en citogenética: conocer enfermedades que están relacionadas con la estructura de los cromosomas y su material que contiene. Un análisis cromosómico: • Estudia las anomalías estructurales y numéricas. • Relaciona dichas anomalías con la aparición de enfermedades y síndromes.

CROMATINA - compone los núcleos de las células - resulta de la interacción del ADN con las proteínas histónicas, no histónicas y ARN. - distintos grados de empaquetamiento - eucromatina o heterocromatina Eucromatina: cromatina mayoritaria, la que constituye la mayor parte del núcleo Heterocromatina : minoritaria = puede aparecer más densamente teñida que la eucromatina (heteropicnosis positiva) o menos densamente teñida que la eucromatina (heteropicnosis negativa). Eucromatina (menos teñida) y Heterocromatina (más teñida)

https://youtu.be/xO6DAfChZMY

CROMATINA - unidad base es nucleosoma = octamero de histonas con ADN =se enrolla hasta formar cromosoma

https://es.wikipedia.org/wiki/Cromosoma#/media/Archivo:Estructuras_cromatina.png

Nucleosoma

https://youtu.be/tQalWZgOTl4

Cromosomas

https://youtu.be/-IiaKyBxLGc

Cromosoma = máximo grado de compactación de la cromatina = dos cromatidas identicas - Brazo pequeño (p) + Brazo largo (q) + centrómero - Centrómero (constricción primaria) = clasificación cromosomas + menos teñido que el resto del cromosoma - Cinetocoro = estructura proteica en el centrómero = permite anclaje de microtúbulos

Tipos de cromosomas

https://youtu.be/vS23ybkQmDk

Tipos de cromosomas

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- En cromosomas eucarióticos- Considerada una de las posibles constricciones secundarias - Contiene la información para producir el ARN-ribosómico - Aparece menos teñida que el resto del cromosoma

Región organizadora del nucleolo (NOR)

https://www.google.es/imgres?imgurl=https%3A%2F%2Fmmegias.webs.uvigo.es%2F5-celulas%2Fampliaciones%2Fimagenes%2F8-cromosomas-partes.png&imgrefurl=https%3A%2F%2Fmmegias.webs.uvigo.es%2F5-celulas%2Fampliaciones%2F8-cromosomas.php&tbnid=QxDa9sZgJUx7yM&vet=12ahUKEwi4-eiBn9b6AhXYg84BHcneBkkQMygBegUIARDNAQ..i&docid=K6LacHJEtIE2FM&w=250&h=248&q=satelite%20cromosoma&ved=2ahUKEwi4-eiBn9b6AhXYg84BHcneBkkQMygBegUIARDNAQ

https://www.google.es/imgres?imgurl=x-raw-image%3A%2F%2F%2Fd64f6dd12f9b627cfbf4f086dfc9530c9831afe309286b0bfb9d15f4b411c7bb&imgrefurl=https%3A%2F%2Fwww.ucm.es%2Fdata%2Fcont%2Fmedia%2Fwww%2Fpag-56185%2F04-El%2520cromosoma%2520eucari%25C3%25B3tico.pdf&tbnid=fGKbL9FtT9Z49M&vet=12ahUKEwjG1Z6-ntb6AhUFhXMKHUTQBLUQMygAegUIARC5AQ..i&docid=oCp5XWwS_5BL9M&w=507&h=187&q=cromosoma%20nor&ved=2ahUKEwjG1Z6-ntb6AhUFhXMKHUTQBLUQMygAegUIARC5AQ

- En cromosomas eucarióticos- Después de zona NOR - NO confundir con DNA satélite

Región satelite del cromosoma

Super repaso

https://youtu.be/lEwtQBSr6C4

Para estudio cromosómico:- extracción de lugares distintos dependiendo de la naturaleza del sujeto -análisis cromosómico posnatal = linfocitos de sangre periférica - extracción posnatal cuando no hay antecedentes de anomalías cromosómicas - en el caso de los bebés = muestra capilar = menos invasiva que una muestra venosa - análisis cromosómico prenatal = amniocentesis, vellosidades coriales o sangre del cordón umbilical - son pruebas muy invasivas y pueden poner en riesgo la vida del embrión - únicamente cuando antecedentes de familiares con anomalías cromosómicas o porque la madre se encuentra en una edad avanzada a la hora de iniciar la gestación.

Técnicas de recolección de la muestra y de sembrado, y cultivo celular

Técnicas de recolección de la muestra y de sembrado, y cultivo celular

Para estudio cromosómico:- si se produce un aborto = de cualquier tejido del feto - menor tiempo posible desde el aborto natural hasta que se realiza el análisis - extracción en diagnóstico de cáncer de sangre = o sangre periférica o muestra de médula ósea - niños o adultos = sangre venas periféricas

Técnicas de recolección de la muestra y de sembrado, y cultivo celular

Técnicas de recolección de la muestra y de sembrado, y cultivo celular

Otros tipos celulares y cultivos: 1. Cultivo de fibroblastos - células del tejido conectivo - se realiza con el medio esencial mínimo (MEM) - crecimiento en monocapa 2. Cultivo de líquido amniótico - distintos medios de cultivo - se realiza de forma similar al de células de vellosidades coriónicas 3. Cultivo de médula ósea - para caracterizar leucemias - extracción de la célula por parte de un médico - necesario mantener los requerimientos específicos de crecimiento celular

Técnicas de recolección de la muestra y de sembrado, y cultivo celular

Otros tipos celulares y cultivos: 4. Cultivo de linfocitos - técnica más utilizada - recolectar linfocitos tras estimular su proliferación - se pueden usar varios medios como el 199, el F-10... - el más utilizado para este tipo de cultivos el RPMI-1640 - NO mantener en estufa más de 72 horas = se produce el máximo de actividad mitótica - a las 72 horas, cromosomas visibles = debe añadirse un inhibidor de la mitosis = inhibir división celular en la metafase, la cual deja los cromosomas visibles

Técnicas de recolección de la muestra y de sembrado, y cultivo celular

- Sacrificio celular = técnica para prueba de cariotipo- lisis de los glóbulos rojos + incremento de volumen en los glóbulos blancos Antes de iniciar la lisis celular: 1. se introduce el antimitótico = linfocitos en el estado de mitosis con los cromosomas visibles 2. se crea un medio hipotónico = se rompe la membrana de los glóbulos rojos sin que se produzca la rotura de los glóbulos blancos Si se produjera lisis en los glóbulos blancos = material genético se esparce por el medio = se debería comenzar el proceso de nuevo

Sacrificio celular. Inhibidores de la mitosis

Mitosis

https://youtu.be/DwAFZb8juMQ

Sacrificio celular. Inhibidores de la mitosis

https://www.google.es/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fwww.significados.com%2Fmicrotubulos%2F&psig=AOvVaw3AJnbEbUdrZ3lNwtZsQ8zP&ust=1665516206802000&source=images&cd=vfe&ved=0CAwQjRxqFwoTCPjEk7-x1voCFQAAAAAdAAAAABAE

https://www.google.es/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fwww.lifeder.com%2Fhuso-mitotico%2F&psig=AOvVaw39HCW0PAaO4MAu8ZLSuwk5&ust=1665516142331000&source=images&cd=vfe&ved=0CAwQjRxqFwoTCMCCq6Cx1voCFQAAAAAdAAAAABAE

Mitosis y microtubulos

https://youtu.be/UV3NM9c-sG0

Sacrificio celular. Inhibidores de la mitosis

https://www.google.es/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fmicrobacterium.es%2Fla-botica-desconocida-contra-el-cancer&psig=AOvVaw3yv36Yiw0i1mLalp0wY-eN&ust=1665515709065000&source=images&cd=vfe&ved=0CAwQjRxqFwoTCKCy4NGv1voCFQAAAAAdAAAAABAr

Taxanos - bloquean la mitosis celular al realizar modificaciones en el huso mitótico - puede ser que inhiba la formación de los microtúbulos = NO división celular - puede que que alargue el huso mitótico = NO se desplazan los cromosomas - actualmente se crean de forma artificial - antiguamente, extracción de plantas del género Taxus.

Inhibidores de la mitosis

Epotilones - se unen a los microtúbulos = inhibir la mitosis - como los taxanos = unen una de las dos proteínas que forman los microtúbulos - Si unen beta- tubulina = inhibe la formación del microtúbulo = NO separación de los cromosomas = bloquea la mitosis.

Inhibidores de la mitosis

Colchicina - Alcaloide de Colchicum autumnale - Evita la polimerización de los microtúbulos = NO mitosis

Vinca alcaloides - Alcaloides = metabolitos secundarios de las plantas - Alcaloides de la vinca = inhibir la polimerización de los microtúbulos = NO mitosis

Inhibidores de la mitosis

ImprontaPasos:1. Realizar un corte al tejido fresco 2. Realizar diversos toques con la parte central del portaobjetos 3. Dejarlo secar al aire. - Técnica para pruebas de diagnóstico oncológico

Técnicas de recogida, procesado y extensión de células

Biopsia - Estudio de cariotipo de un aborto - Extracción de una muestra de cualquier tipo de tejido - ej. biopsia es la de vellosidades coriales

https://www.google.es/imgres?imgurl=https%3A%2F%2Fmedlineplus.gov%2Fspanish%2Fency%2Fimages%2Fency%2Ffullsize%2F9140.jpg&imgrefurl=https%3A%2F%2Fmedlineplus.gov%2Fspanish%2Fency%2Fesp_imagepages%2F9140.htm&tbnid=_iZHUlgU7H0MHM&vet=12ahUKEwjFoLf1tNb6AhUhgM4BHZ4mDjAQMygDegUIARDBAQ..i&docid=_9VK0pa-yJ3qJM&w=400&h=320&q=frotis%20bucal%20citologia&hl=es&ved=2ahUKEwjFoLf1tNb6AhUhgM4BHZ4mDjAQMygDegUIARDBAQ

Frotis - Se desliza un bastoncillo de algodón sobre la zona de interés - Obtenida la muestra = se desliza el bastoncillo por el portaobjetos dando vueltas para que se transfieran las células

Técnicas de recogida, procesado y extensión de células

Extracción de líquido - Ejemplos: extracción de sangre periférica (mínimo de 2,5 ml de dos muestras) o líquido amniótico - Analizar rapidamente = evitar que las células se estropeen

Técnicas de recogida, procesado y extensión de células

https://youtu.be/4EXkn9QsysU

Frotis

Frotis 2

https://youtu.be/jmORXNYz-tQ

Extensión sanguínea - Realizar una extensión de las gotas de sangre = frotis - Utilizar dos portaobjetos o un portaobjetos y un cubreobjetos - Pasos:1. Dejar caer unas pocas gotas de la muestra de sangre en el portaobjetos 2. Apoyar el otro portaobjetos sobre el primero e inclinar a unos 40grados 3. Deslizar el porta de arriba hasta que establezca contacto con la muestra 4. De manera rápida y suave desplazar el porta superior por el porta inferior arrastrando la gota tras él.

Técnicas de recogida, procesado y extensión de células

Técnicas de recogida, procesado y extensión de células

Aplastamiento - Se deposita un portaobjetos o un cubreobjetos encima de la muestra sanguínea - Se produce un arrastre de la muestra por la presión que soporta la muestra que le obliga a deslizarse lateralmente - Técnica que puede generar una capa demasiado gruesa de células impidiendo observar bien las muestras al microscopio. Flameado - Puede romper células por el exceso de calor - Pasos: 1. Depositar unas pocas gotas de sangre sobre el portaobjetos. 2. Inclinar el portaobjetos para que la sangre ocupe la mayor área 3. Acercar ligeramente la muestra a la llama de un mechero Bunsen (fijación) 4. Dejar secar al aire o realizando ligeros movimientos

Técnicas de recogida, procesado y extensión de células

Técnicas de recogida, procesado y extensión de células

Técnicas de recogida, procesado y extensión de células

Técnicas de recogida, procesado y extensión de células

Cariotipo - Representación del patrón cromosómico de la dotación de una célula somática en división. - Especies diploides, como la especie humana, el número de cromosomas normal (el más frecuente) es 2n=46, de manera que existen 22 pares de autosomas y un par de cromosomas sexuales - Código del cariotipo :- Los cromosomas se colocan de mayor a menor y por la posición del centrómero - Se colocan los cromosomas sexuales, independientemente de cuál sea su tamaño, al final

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

Cariotipo

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

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https://www.google.es/imgres?imgurl=x-raw-image%3A%2F%2F%2F8d7239a8041a5732544a8773c69941fd07b24989d8bf06894b8db95f59e5c77d&imgrefurl=https%3A%2F%2Fwww.ege.fcen.uba.ar%2Fwp-content%2Fuploads%2F2019%2F05%2FGuia-1erTP-Citogen-%25C2%25AEtica-1C2019.pdf&tbnid=MlcaBKg5co3z5M&vet=12ahUKEwiF1Nyevdb6AhXP44UKHfpIDaQQMygEegUIARDUAQ..i&docid=64Np1LofOMABiM&w=566&h=517&q=grupos%20cromosomas&ved=2ahUKEwiF1Nyevdb6AhXP44UKHfpIDaQQMygEegUIARDUAQ

Patrones de identificación - Diploide = término que se refiere al número de cada tipo de cromosomas que tiene un organismo - Los humanos tienen 46 cromosomas - Clasificación en siete grupos distintos = grupo A - grupo G - Clasificación según tamaño de los cromosomas y su morfología

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

Patrones de identificación Cromosomas grandes: –Grupo A: pares de cromosomas 1, 2 y 3. –Grupo B: pares de cromosomas 4 y 5 Cromosomas medianos: –Grupo C: pares de cromosomas 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12 y por los cromosomas X (en caso de ser mujer) –Grupo D: pares de cromosomas 13, 14 y 15 •Cromosomas pequeños: –Grupo E: pares de cromosomas 16, 17 y 18 –Grupo F: pares de cromosomas 19 y 20 –Grupo G: pares de cromosomas 21, 22 y por el cromosoma Y (si lo hubiera al ser hombre el sujeto), siendo todos ellos acrocéntricos.

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

https://youtu.be/yZypE8k4Xe0

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

https://th.bing.com/th/id/R.2c448e26258be4637906f7d6fc36ed27?rik=b4jSKFSMQerE5A&riu=http%3a%2f%2f1.bp.blogspot.com%2f-0YK-yMSDQhQ%2fT4tfXmqBl-I%2fAAAAAAAAAEY%2fAXEhboAHU_8%2fs200%2fchromosomesweb.jpg&ehk=5%2fZ9yWXEUZqKqcEy0S1BfjBcFjOVy7sQrWN4EGLl230%3d&risl=&pid=ImgRaw&r=0

Ideograma • La representación gráfica de un cromosoma utilizando técnicas de bandeo resolutivos (Giemsa, por ejemplo). • Muestra la relación entre los brazos cromosómicos, posición del centrómero, disposición de los tallos cromosómicos y sus satélites.

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

Fórmula cromosómica - Descripción del cariotipo: • Se especifica el número de cromosomas en una célula somática, seguida de una coma y el número de cromosomas sexuales. • Las aberraciones, si existen en número o en estructura, se especifican a continuación, separadas de una coma.

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

Actividad 1

https://www.google.es/imgres?imgurl=https%3A%2F%2Fupload.wikimedia.org%2Fwikipedia%2Fcommons%2Fthumb%2Fa%2Fa7%2FChromosome_7.svg%2F125px-Chromosome_7.svg.png&imgrefurl=https%3A%2F%2Fes.wikipedia.org%2Fwiki%2FCromosoma_7_(humano)&tbnid=C11kK8LCbwXDsM&vet=12ahUKEwiM-euTzdj6AhUNg84BHdI0BAsQMygFegUIARDCAQ..i&docid=rlOnKfuomzZo5M&w=125&h=351&q=cromosoma%207%20fibrosis%20qu%C3%ADstica&ved=2ahUKEwiM-euTzdj6AhUNg84BHdI0BAsQMygFegUIARDCAQ

1. Describir donde se encuentra el ADN en la célula y argumentar respuesta 2. Explicar si el DNA está presente en los organismos eucariotas y procariotas, donde se ubica y algunas características en común y otras diferentes. 3. Describir, a partir del DNA, como se forman los cromosomas (teniendo en cuenta las histonas, octameros y nucleosomas) y explicar la esctructura de estos. 4. Describir las características de los cromosomas del cariotipo humano atendiendo a la posición del centrómero. Dibujarlos también, de forma sencilla. 3. ¿Qué es el cariotipo? ¿Cómo se clasifican los cromosomas humanos? 4. Buscar un catálogo de cariotipos de diferentes especies de animales y plantas. Añadir imagenes para consulta. 5. Cual sería el cariotipo de: a) un hombre y una mujer sana; b) sindrome de Down; c) sindrome de Turner; d) sindrome de Klinefelter

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

¿Cómo se asigna una banda cromosómica? - el orden es el siguiente: 1. número de cromosoma 2. símbolo del brazo 3. número de la región 4. número de la banda de esa región (asignado desde el centrómero y hacia el telómero del brazo) 5. Poner punto decimal a continuación del número de banda y seguido del número asignado a la subbanda

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

1.número de cromosoma 2. símbolo del brazo 3. número de la región 4. número de la banda de esa región (asignado desde el centrómero y hacia el telómero del brazo) 5. Poner punto decimal a continuación del número de banda y seguido del número asignado a la subbanda

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

https://www.google.es/imgres?imgurl=https%3A%2F%2Fupload.wikimedia.org%2Fwikipedia%2Fcommons%2Fthumb%2Fa%2Fa7%2FChromosome_7.svg%2F125px-Chromosome_7.svg.png&imgrefurl=https%3A%2F%2Fes.wikipedia.org%2Fwiki%2FCromosoma_7_(humano)&tbnid=C11kK8LCbwXDsM&vet=12ahUKEwiM-euTzdj6AhUNg84BHdI0BAsQMygFegUIARDCAQ..i&docid=rlOnKfuomzZo5M&w=125&h=351&q=cromosoma%207%20fibrosis%20qu%C3%ADstica&ved=2ahUKEwiM-euTzdj6AhUNg84BHdI0BAsQMygFegUIARDCAQ

1.número de cromosoma 2. símbolo del brazo 3. número de la región 4. número de la banda de esa región (asignado desde el centrómero y hacia el telómero del brazo) 5. Poner punto decimal a continuación del número de banda y seguido del número asignado a la subbanda

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

1. Bandas G - Dos protocolos:- tinción con Giemsa - tinción con Wright- Estudio del cariotipo = generalmente, bandas con Giemsa- Se añade tripsina para digestion proteínas - Presupuesto : los cromosomas no se encuentran condesados de igual manera en toda su estructura = donde cromosomas más condensados es más complicado que actúe la tripsina = zonas oscuras - Zona ricas en AT = más oscuras - Zonas ricas en GC = más claras

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

1. Bandas G - protocolo Pasos: 1. Dejar la preparación a unos 65ºC C durante al menos 14 horas (o 72 horas, en caso de dejar las muestras a temperatura ambiente) 2. Realizar la solución de tripsina y ponerla a incubar a 37ºC 3. Pasar durante unos segundos la muestra por la solución de tripsina 4. Lavar la muestra con agua destilada. 5. Realizar la tinción de Giemsa, estando esta en una solución al 2%, durante 10 minutos. 6. Lavar de nuevo con agua. 7. Dejar secar

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

Aplicaciones Bandeo G: - Pruebas de paternidad - Identificación del cromosoma Y - Conocer el origen parental de alteraciones cromosómicas - Detectar anomalías estructurales - Confirmar alteraciones cromosómicas previstas en un cuadro clínico

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

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https://biomodel.uah.es/citogene/horwitz/cytogen1.htm

- Los cromosomas se tiñen con Giemsa posterior a un tratamiento térmico- Patrón de bandas que se obtiene es el inverso que en el bandeo G - Utilizado para identificar las regiones teloméricas - Las regiones ricas en pares G-C aparecen más teñidas - Técnica de bandeo complementaria al bandeo G.

Bandeo R

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

https://www.google.es/imgres?imgurl=https%3A%2F%2Fimage.slidesharecdn.com%2Ftecnicasdebandeocromosomico-150618194044-lva1-app6891%2F85%2Ftecnicas-de-bandeo-cromosomico-19-320.jpg%3Fcb%3D1434656707&imgrefurl=https%3A%2F%2Fes.slideshare.net%2Fjohnnyalexanderaguilarmontalvan%2Ftecnicas-de-bandeo-cromosomico&tbnid=e6q0X0SFaBriaM&vet=12ahUKEwiTyMnp0dj6AhUJhxoKHXifDRIQMygDegUIARDDAQ..i&docid=mBXPi9E9HdWadM&w=320&h=240&q=bandeo%20q%20cromosomas&ved=2ahUKEwiTyMnp0dj6AhUJhxoKHXifDRIQMygDegUIARDDAQ

- Se utiliza la quinacrina o mostaza de quinacrina. - Genera un patrón de bandas fluorescentes en lugares donde predominan los pares de bases A-T - Las bandas Q brillantes coinciden con las bandas G oscuras.

Bandeo Q

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

- Tinción de la heterocromatina constitutiva = muy condensada = poca expresión génica - Heterocromatina constitutiva en todos los centrómeros de los cromosomas - Además, regiones subcentroméricas de los cromosomas 1, 9, 16 e Y - Se tratan los cromosomas con calor o con álcalis (NaOH). - Se utiliza Giemsa o un fluorocromo (actinomicina D o cromomicina) - Se tiñen los centrómeros y zonas de heterocromatina constitutiva

Bandeo C

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

- Giemsa + disoluciones de ácido clorhídrico (HCl) e hidróxido bárico (Ba(OH)2). Pasos: 1. Dejar las muestras a 65ºC C durante al menos 16 horas en la estufa. 2. Lavar la muestra con agua destilada. 3. Introducir la muestra en una solución de HCl 0,2 N durante un tiempo variable. 4. Lavar con agua destilada. 5. Dejar secar al aire. 6. Introducir la muestra en la solución de Ba(OH)2 a una temperatura y durante un tiempo variable. ------ sigue-------->

Bandeo C

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

7. Lavar con agua destilada para quitar los restos de bario. 8. Incubar las muestras en 2 x SSC (una solución salina) a 65ºC durante un tiempo variable. 9. Lavar la muestra con agua destilada. 10.Dejar la muestra secar al aire. 11.Deshidratar con etanol. 12.Dejar secar al aire. 13.Teñir con Giemsa durante tiempo variable. 14. Lavar con agua. 15.Dejar secar al aire

Bandeo C

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

Las aplicaciones del bandeo C son: • Marcador genético poblacional. • Determinar el origen de trisomías en cromosomas polimórficos. • Realizar pruebas de paternidad. • Observar roturas o translocaciones en áreas cercanas al centrómero

Bandeo C

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

- Visualización de las regiones NOR (regiones organizadores nucleolares) - Tratamiento con nitrato de plata - Solo tiñe regiones NOR activas = nitrato de plata tiñe las proteínas adyacentes a las NOR

Bandeo NOR

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

- Existen dos protocolos: Protocolo 1. 1.Dejar envejecer la muestra siguiendo un proceso similar a los anteriores, unas horas en caso de utilizar estufa y unos días si se realiza a temperatura ambiente. 2. Depositar unas gotas de nitrato de plata. 3. Depositar un cubre sobre la muestra. 4. Incubar en una estufa a unos 37ºC con humedad entre 18 y 24 horas. 5. Retirar el cubre. 6. Lavar la muestra con agua destilada. 7. Dejar secar al aire libre.

Bandeo NOR

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

- Existen dos protocolos: Protocolo 2. 1. Envejecer la muestra como se ha comentado anteriormente. 2. Depositar una mezcla de unas gotas de nitrato de plata con gelatina. 3. Depositar un cubre sobre la muestra. 4. Incubar a unos 70ºC C hasta que la muestra alcanza un color amarillento (tarda unos minutos en alcanzar este color) . Retirar el cubre. 6. Lavar la muestra con agua destilada. 7. Dejar secar al aire libre.

Bandeo NOR

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

Bandeo cromosómico

https://youtu.be/GBK-XGROHvg

Resumen breve

https://youtu.be/l8qrTekY9ek

Aplicaciones del bandeo NOR • Permite identificar cromosomas acrocéntricos. • Estudio de reorganizaciones en zonas de cromosomas acrocéntricos. • Estudio de polimorfismos cromosómicos. • Estudio de la actividad de los genes RNA ribosómico y efecto de los mutágenos en estadíos de diferenciación celular

Bandeo NOR

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

Métodos de tinción y bandeado cromosómico

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Actividad 2