Lisa diapo alternance

Licence Professionnelle OBQI

Session 2021-2022

Mise en place d'une méthode non normalisée pour tester la sensibilité des souches internes

Lisa gicquel

Alexandre

noblecourt

Julien

matysiak

Tuteurs :

Sommaire

1. Introduction

2. Présentation de l'entreprise

3. Mes activités réalisées au laboratoire

4. Ma thématique d'alternance et son intérêt

5. Conclusions et perspectives

Préparation des consommables, métrologie, projet interne, contrôle air et surfaces, gestion du souchier

Mise en place d'une méthode non normalisée pour tester la sensibilité des souches en interne (remplacer la NF EN 1040)

1. Introduction

* Suivi de croissance bactérienne/ utilisation d'un lecteur de microplaque

2. Présentation de l'entreprise

ISO 17 025

Biocide :

évaluation de l'efficacité des désinfectants

Challenge test : évaluation de l'efficacité des conservateurs

Désinfectants, antiseptiques, cosmétiques, pharmaceutiques

Laboratoire MIDAC

Bactéries, levures,

moisissures, virus

Contrôle qualité :

évaluation de la conformité des produits / dosage des antibiotiques

Préparation du matériel

Préparation des milieux

3. Mes activités réalisées au laboratoire

Figure 1 : Fiche préparation du milieu BHIY-L

- Pesée, dissolution, mesure du pH, conditionnement, stérilisation

- Géloses

- Bouillons ( chimiques ou nutritifs) -Substances interférentes

Métrologie

3. Mes activités réalisées au laboratoire

Vérification de l'etuve

Vérification : confirme que l'erreur de mesure est plus petite que l'EMT

Etalonnage : estime l'erreur de l'instrument afin de la corriger pour la compenser

Objectif : s'assurer de la conformité du matériel et donner des résultats de qualité

Figure 2 : Cartographie d'une étuve à 32,5°C +/- 2,5°C

Métrologie

3. Mes activités réalisées au laboratoire

Etalonnage des thermomètres

- Comparaison de la température lue avec la température du thermomètre étalon

Figure 3 : Etiquette mise sur le thermomètre avec la correction associée

Vérification des pipettes

- Vérification : volume prélevé = volume réel

Projet matériel

-Répertorier tout le matériel du laboratoire

- Faciliter la gestion du matériel

Contrôle air et surfaces

Objectif : mesurer l'indice d'hygiène pour s'assurer de la propreté du laboratoire

-Nombre de colonies < critère => conforme

-Nombre de colonies > critère => Non conforme / Nettoyage

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

- Tester la sensibilité -> Vérifier l'absence de mutations

-Evaluation de l'activité bactéricide de base des antiseptiques et désinfectants chimiques

- Connaître l'activité face à différentes concentrations de produits

- 5 minutes à 20°C

- Réduction de 5 log du nombre de bactéries = concentration bactéricide

Mise en place du projet

NF EN 1040

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

- Réalisation de 2 suspensions pour la numération (1 pour les essais, 1 pour les témoins) : détermine le nombre de micro-organismes présent au départ

- Réalisation de 3 témoins :

■ Témoin A : validation des conditions expérimentales et vérifier l’absence d’effet létal des conditions

■ Témoin B : vérification de l’absence de toxicité du neutralisant

■ Témoin C : Validation de la dilution-neutralisation

- Réalisation des essais : On met en contact le produit sur les micro-organismes 5 minutes à 20°C puis on neutralise

Figure 4: Résultats des tests de sensibilité sur deux ans

Demarche scientifique

-Mise en contact d'une concentration non inhibitrice d'agents anti-microbiens avec des suspensions de bactéries

Mise en place d'une méthode non normalisée pour tester la sensibilité des souches internes

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

cROISSANCE BACTérienne

Ln (Do)

Figure 5 : Courbe de croissance bactérienne Ln(Do) = f(t)

-Suivi de la croissance grâce aux mesures de la densité optique

- 6 phases distinctes

-Détermination de la vitesse spécifique de croissance = vitesse de multplication "µ" en h^-1

Courbe de croissance

Heure

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

cROISSANCE BACTérienne

Ln (Do)

Figure 6 : Courbes de croissance bactérienne en absence et en présence d'agent anti-microbien

-Recherche d'une concentration qui ralentit la vitesse spécifique de croissance

- Concentration inhibitrice = pas de croissance bactérienne

Courbes de croissance en présence d'agent anti-microbien

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

cROISSANCE BACTérienne

Paramètres étudiés

-En absence et en présence de phénol pour chaque souche

- Pour la vitesse spécifique de croissance : la moyenne, la valeur minimale, la valeur maximale, l'écart-type et l'incertitude élargie

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

mise en place du projet

Choix des souches et du produit

Escherichia coli

Bacille G-

Staphylococcus aureus

Coque G+

Enterococcus hirae

Coque G+

Pseudomonas aeruginosa

Bacille G-

Phénol

Lecteur de microplaque

Figure 7 : Multiskan FC de chez ThermoScientific

- λ = 620nm

- Agitation faible

- T°C incubation : 30°C

- Présence d'un film adhésif => éviter l'évaporation

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

Mise en place du projet

choix du bouillon

Bouillon Tryptone soja

Bouillon mueller-hinton

- 50µL de supsension à 0.2 Do + 50 µL de bouillon (x3)

-=> Milieux nutritifs qui permettent la croissance des bactéries

Figure 8: Courbes de croissance en fonction du temps en TSB

Ln(Do)=f(t)

Figure 9: Courbes de croissance en fonction du temps en BMH

Ln(Do)=f(t)

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

Mise en place du projet

Paramètres de la vitesse spécifique

pour chaque souche sans phénol

- Réalisé 10 fois pour chaque souche = reproductibilité

- Objectif : Obtenir un intervalle de valeurs pour lequel la manipulation (contrôle de croissance) sera valide/conforme

Figure 10 : Résultats de l'incertitude pour les vitesses spécifiques de croissance de chaque souche

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

Mise en place du projet

choix de la concentration

- Gamme de dilutions de phénol allant de 0 à 0,5%

- Suivi de la densité optique pendant 12h

Figure 11: Courbes de croissance de S.aureus en présence de phénol 0 à 0,5%

Figure 12 : Courbes de croissance de E.hirae en présence de phénol 0 à 0,5%

- 50 µL de suspension à 0,2 Do + 50 µL de produit

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

Mise en place du projet

choix de la concentration

Figure 13 : Courbes de croissance de E.coli en présence de phénol 0 à 0,5%

Figure 14: Courbes de croissance de P.aeruginosa en présence de phénol 0 à 0,5%

- 0,1% pour Staphylococcus aureus

- 0,1% pour Pseudomonas aeruginosa

- 0,1% pour Escherichia coli

- 0,3% pour Enterococcus hirae

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

Mise en place du projet

Comparaison des courbes et détermination des paramètres de la vitesse spécifique de croissance

Figure 15 : Courbes de croissance de P.aeruginosa en présence et en absence de phénol à 0,1%

Figure 16 : Cartographie des valeurs "µ" en h^-1 pour P.aeruginosa

-Valide/conforme : si la valeur est comprise entre 0,1196 et 0,2396 h^-1

Absence de phénol

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

Mise en place du projet

Comparaison des courbes et détermination des paramètres de la vitesse spécifique de croissance

Figure 17 : Courbes de croissance de S.aureus en présence et en absence de phénol à 0,1%

Figure 18 : Cartographie des valeurs "µ" en h^-1 pour S.aureus

-Valide/conforme : si la valeur est comprise entre 0,2372 et 0,3972 h^-1

Absence de phénol

4. Ma thématique d'alternance et son intêret

Mise en place du projet

Comparaison des courbes et détermination des paramètres de la vitesse spécifique de croissance

Figure 19: Courbes de croissance de E.coli en présence et en absence de phénol à 0,1%

-Valide/conforme : si la valeur est comprise entre 0,3276 et 0,3676 h^-1

Absence de phénol

Figure 20: Courbes de croissance de E.hirae en présence et en absence de phénol à 0,3%

Absence de phénol

-Valide/conforme : si la valeur est comprise entre 0,2406 et 0,3206 h^-1

5. Conclusions et perspectives

" Mise en place d'une méthode non normalisée pour tester la sensibilité des souches internes"

- 0,4436 ± 0,1 pour P.aeruginosa

- 0,4796 ± 0,08 pour S.aureus

- 0,4581 ± 0,04 pour E.coli

- 0,3506 ± 0,02 pour E.hirae

- 0,1796 ± 0,06 pour P.aeruginosa

- 0,3172 ± 0,08 pour S.aureus

- 0,3476 ± 0,02 pour E.coli

- 0,2806 ± 0,04 pour E.hirae

Nouvelles souches

Produit moins dangereux

Détermination du nombre de bactéries final / temps des phase de latence

Nouvelle méthode d'inoculation de la souche

Sans phénol

Avec phénol

Autonomie

Travail en équipe

Sens de l'organisation

Projet : Master Management des risques QSE & RSE

Intéressant de voir le comportement des souches dans différentes conditions

MERCI DE VOTRE ATTENTION

Lisa diapo alternance

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