EMPEZAR
1ère spé SVT
Test 25 de connaissances
Immunité et Santé
Tests d'Ouchterlony et d'Élisa
Une question affichée, pas de QCM.
Faites afficher la réponse pour comparer avec la vôtre.
Pas de compteur, l'objectif étant simplement de faire l'état de vos connaissances.
16 questions
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By ProfSVT71
Question 1
Question 2
Question 3
Question 4
Question 5
Question 6
Question 7
Question 8
Question 9
Question 10
Question 11
Question 12
Question 13
Question 14
Question 15
Question 16
Sommaire
sommaire
QUESTION 1
À quoi sert l'immunodiffusion double ou test d'Ouchterlony ?
Réponse
L'immunodiffusion double (ou immunodiffusion double d'Ouchterlony ou test d'Ouchterlony) est une technique immunologique utilisée dans la détection, l'identification et la quantification d'anticorps et d'antigènes, comme les immunoglobulines et les antigènes nucléaires. Cette technique est nommée d'après Örjan Ouchterlony, un physicien suédois qui a inventé le test en 1948.
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QUESTION 2
Réponse
Quel est le protocole du Test d'Ouchterlony ?
Une couche de gélose contenue dans une boîte de Pétri est percée de trous (ou "puits") de façon équidistante : un puits central et des puits extérieurs. Il existe deux configurations possibles : AC en puits central et AG en puits extérieurs ou l’inverse.
On laisse les solutions diffuser dans la gélose autour de leurs puits respectifs pendant 48 heures.
800px-Ouchterlony_Double_Diffusion, User:Proquence domain epublic, https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Ouchterlony_Double_Diffusion.JPG
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QUESTION 3
Comment lire le test d'Ouchterlony ?
Réponse
Là où les fronts de diffusion se rencontrent, si les anticorps reconnaissent un des antigènes, ils s'y lient et forment un complexe immun. Le complexe immun créera un précipité blanc en forme de ligne ou d'arc, ce qui est une signature visuelle de la reconnaissance d'un antigène. La partie convexe de l’arc de précipitation est toujours orientée du côté du puits de l’antigène.
source : Immunofiffusion.jpg par DarreenvtVia wikimédia commons, CC-BY-SA-4.0, https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Immunofiffusion.jpg?uselang=fr
Résultat séropositif pour les individus 1 et 4 concernant l’Ag AIE.
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QUESTION 4
Dans quel but
ce test peut-il être utilisé ?
Réponse
800px-Ouchterlony_Double_Diffusion, User:Proquence domain epublic, https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Ouchterlony_Double_Diffusion.JPG
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Le test d'Ouchterlony permet de :
- prouver la spécificité d’un anticorps vis à vis d’un antigène
- vérifier la sérologie d’un patient en identifiant les anticorps contenus dans son sérum
- identifier les antigènes contenus dans un sérum d’un patient
- prouver que la production d’AC fait suite à un contact avec un AG ou effectuer la sérologie de plusieurs patients en même temps.
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Réponse
Comment prouver la spécificité d'un AC pour un AG en utilisant le test d'Ouchterlony?
QUESTION 5
Placer un sérum contenant un AC précis dans le puits central et placer des antigènes connus dans les puits extérieurs. La présence d’un seul arc de précipitation entre le puits central et un des puits extérieurs traduira la spécificité de l’AC contre un AG donné. (partie gauche du schéma, en gris)
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Réponse
Comment vérifie-t-on la sérologie (la présence d'AC) d’un patient ?
QUESTION 6
Pour cela il faut placer le sérum du patient dans le puits central et placer des antigènes connus dans les puits extérieurs. La présence d’arcs de précipitation entre le puits central et certains puits extérieurs traduira la séropositivité de l'individu pour les antigènes contenus dans ces puits (partie gauche du schéma, en gris)
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Réponse
Comment identifier une infection débutante chez un patient ?
QUESTION 7
Un individu infecté possède dans son sérum des agents pathogènes porteurs de molécules particulières identifiées comme des antigènes. On cherche à les mettre en évidence. Pour cela il faut placer le sérum du patient dans le puits central et placer dans les puits extérieurs des solutions d’anticorps dirigés contre différents antigènes connus et recherchés chez ce patient. La présence d’arcs de précipitation entre le puits central et certains puits extérieurs traduira la présence d’antigènes et donc d’agents infectieux dans le sérum de l'individu. (partie droite du schéma, en bleu ciel)
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QUESTION 8
Comment effectuer la sérologie de plusieurs patients en même temps ?
Réponse
Pour effectuer la sérologie de plusieurs patients en même temps, il faut verser dans le puits central une solution contenant l’antigène de l’agent infectieux recherché chez ces patients. Les puits extérieurs vont contenir chacun le sérum d'un patient à diagnostiquer. Les arcs de précipitation indiqueront les patients séropositifs, c’est à dire contenant les AC dirigés contre les AG de l’agent infectieux en question (exemple test de séropositivité pour le VIH, partie droite du schéma, en bleu ciel)
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QUESTION 9
Qu'est-ce que le Test ELISA ?
Réponse
La technique de dosage d’immunoabsorption par enzyme liée ou test ELISA ( Enzyme-Linked Immuno Assay en anglais) est principalement utilisée en immunologie afin de détecter et/ou doser la présence de protéines, d’antigènes ou d’anticorps dans un sérum. Elle est utilisée notamment pour le dépistage du VIH, et permet de déterminer la séropositivité ou séronégativité d’un individu.
source : Microtiter plate.JPG, via wikimedia commons, par Jeffrey M. Vinocur, Own work, attribution required (Multi-license with GFDL and Creative Commons CC-BY 2.5),https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Microtiter_plate.JPG?uselang=fr
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QUESTION 10
Qu'est-ce qu'un test Elisa indirect ?
Réponse
Le test ELISA indirect consiste à détecter la présence d’un anticorps spécifique dans un échantillon de sérum. On ne cherche pas directement l'AG mais une molécule qui réagit avec lui, c'est à dire l'AC. Si l'AC est présent dans le sérum testé c'est que l'AG est présent chez le patient.
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QUESTION 11
De quoi a-t-on besoin pour réaliser un Test ELISA indirect ?
Réponse
Pour faire un test Elisa indirect il faut :
- un échantillon de sérum à analyser
- un AG connu spécifique à l’AC recherché
- un anticorps traceur dirigé contre les anticorps humain et couplé à une enzyme (la peroxydase)
- du substrat spécifique à l’enzyme, ici du TMB ( 3,3',5,5'-tétraméthylbenzidine)
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QUESTION 12
En quoi consiste la première étape du Test ELISA indirect ?
Réponse
1ère étape :
a) Fixation de l’antigèneL’antigène connu, spécifique de l’anticorps recherché, est fixé de manière électrostatique au fond de cupules de test (des puits). Les puits sont ensuite lavés pour enlever les antigènes non fixés.b) Fixation de l’anticorps à détecter
On verse le sérum à tester dans le puits. S’ils sont présents, les anticorps spécifiques vont se fixer aux antigènes au fond du puit. Un lavage des puits est effectué pour enlever les anticorps non fixés.
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QUESTION 13
Quelle est la deuxième étape du Test ELISA indirect ?
Réponse
2ème étape : Fixation de l'anticorps traceur
On verse dans le puit la solution contenant les anticorps traceurs. Ceux-ci ne peuvent se fixer que sur des anticorps humains. Ainsi si des anticorps humains dirigés contre l’antigène du puits ont été fixés à l’étape précédente, les anticorps traceurs pourront se fixer sur ceux-ci lors de cette étape. Dans le cas contraire ils seront éliminés lors du rinçage.
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QUESTION 14
En quoi consiste la dernière étape du Test ELISA indirect ?
Réponse
Dernière étape : la révélation
On verse dans le puits, la solution contenant le substrat de l’enzyme fixée à l’anticorps traceur. Ce substrat ne pourra être transformé en produit que si le puits contient l’enzyme, c’est à dire si le puits contient des anticorps traceurs fixés aux anticorps humains eux même fixés aux antigènes situés au fond du puit. Le produit formé est de couleur bleue. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la quantité d’enzyme présente et donc à la concentration d’anticorps recherchés. Un puits bleu indique une séropositivité et un puit incolore traduit une séronégativité.
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QUESTION 15
Comment fonctionne le test ELISA dit "en Sandwich" ?
Réponse
Le test Elisa dit en "sandwich" consiste à détecter directement dans un sérum la présence d’antigènes. Au fond des puits, se trouvent des anticorps dirigés contre un antigène donné. Si le sérum du patient contient l’antigène, celui-ci sera fixé par les anticorps accrochés au fond du puits. L’anticorps traceur est un anticorps également dirigé contre l’antigène et possédant une enzyme de révélation : l’antigène est pris en sandwich entre deux anticorps.
source : Elisa po?rednia i bezpo?rednia.svg, par Wektoryzacja Harkonnen2 via wikimedia commons, CC-BY-SA-3.0-migréhttps://commons.wikimedia.org/wiki/File:Elisa_po%C5%9Brednia_i_bezpo%C5%9Brednia.svg
source : ELISA.jpg, par BiotechMichael , via wikimedia commons, domaine public, https://en.m.wikipedia.org/wiki/File:ELISA.jpg
Représentation en cas de séropositivité dans un Test ELISA en sandwich :
Étoile rouge : AG
Rond jaune : enzyme
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QUESTION 16
Interprétez ce test ELISA dit "en Sandwich".
Réponse
source : Mock ELISA results.png, via Wikimedia commons, par Gurustip sur Wikibooks anglais, domaine public, https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Mock_ELISA_results.png
Patient A : séronégatif
Patient B : séropositif, faible concentration d’AC, infection ancienne
Patient C : séropositif, forte concentration d’AC, infection récente
The end !!
source : Mock ELISA results.png, via Wikimedia commons, par Gurustip sur Wikibooks anglais, domaine public, https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Mock_ELISA_results.png
