5. Wyizolowanie DNA z komórek owocu kiwi

2.

1.

Jak to zrobić? - filmik instruktażowy

Temat: Wyizolowanie DNA z komórek owocu kiwi

Co będzie potrzebne:

• 1 owoc kiwi
• płaska łyżeczka soli kuchennej
• 100 ml wody
• 10 ml 95% alkoholu etylowego (najlepiej zamrożonego lub przynajmniej schłodzonego)
• duża kropla skoncentrowanego (gęstego) płynu do mycia naczyń
• naczynia: szklanka, probówka, lejek, miseczka, miska
• statyw na probówki
• lód
• deska do krojenia
• nóż
• moździerz
• tłuczek
• filtr do kawy
• wykałaczka
• lniana ściereczka

Instrukcja

• Rozpuść jedną łyżeczkę soli kuchennej w 1oo ml wody
• Kilka kostek lodu wrzuć do miseczki
• Z kiwi wykrój kostkę o wymiarach 1cm x 2cm x3cm i pokrój bardzo drobno
• Poszatkowany miąższ włóż do moździerza

• Wlej dwie łyżeczki roztworu soli
• Utrzyj całość na gładką masę – niszczysz w ten sposób ścianę i błonę komórkową
• Uzyskaną masę przenieś do szklanki
• Dolej do niej roztworu soli, aby objętość zawiesiny zwiększyła się około dwu- trzykrotnie - zaznacz sobie markerem wysokość
• Dodaj dużą kroplę płynu do mycia naczyń
• Delikatnie pomieszaj tak, żeby roztwór się nie spienił

• Włóż szklankę do miski z lodem - lód powinien sięgać nieco niżej niż poziom płynu w szklance mieszając zawiesinę co pewien czas
• Odczekaj około 5 minut
• Mieszaj potem tak długo, aż zawiesina stanie się lepka - lepkość sprawdzaj palcami, dotykając wykałaczki zanurzonej w zawiesinie
• Umieść probówkę na statywie i włóż do niej lejek wyłożony filtrem do kawy zwilżonym wodą

• Mieszaninę wyjmij z lodu i przelej do lejka
• Odczekaj, aż w probówce zbierze się przesącz
• Usuń lejek, lekko przechyl probówkę i bardzo ostrożnie nalej po ściance zmrożony spirytus - jego objętość nie powinna być większa niż objętość przesączu - zaznacz sobie markerem
• Odstaw probówkę na 2-3 minuty
• Obserwuj zawartość probówki. Zwróć uwagę na małe, białe kłaczki pojawiające się na styku spirytusu i zawiesiny
• Po 1o minutach zbiorą się one na powierzchni płynu
• Można je nawet nawinąć na wykałaczkę i wyjąć z roztworu – po wysuszeniu stają się niewidoczne

PODSUMOWANIE Kwas deoksyrybonukleinowy (DNA) znajduje się w JĄDRACH KOMÓRKOWYCH, MITOCHONDRIACH I CHLOROPLASTACH

Żeby uwolnić go z tych struktur, trzeba zniszczyć ściany i błony komórkowe poprzez rozcieranie, a następnie wypłukać go przy użyciu wodnego roztworu soli Pomaga w tym detergent zawarty w płynie do mycia naczyń

Uwolniony DNA zostałby szybko rozłożony przez enzymy zawarte w zniszczonych komórkach By do tego nie dopuścić, mieszaninę się chłodzi, gdyż w temperaturze bliskiej 0°C enzymy są mało aktywne

Odsączenie zawiesiny kiwi na filtrze służy oddzieleniu DNA od fragmentów tkanek Alkohol i jony chlorku sodu powodują wytrącanie się DNA, który tworzy duże kompleksy widoczne w roztworze jako długie nitki