Elisa

Método Elisa

Por Rolando Araos M.

El método Elisa proviene de la sigla en inglés que significa "inmuno absorción ligado a enzimas".

Método Elisa

Es una técnica rápida, no tan costosa y permite tomar decisiones en el momento que el productor lo requiera.

Método Elisa

Existen diversas formas de emplear esta técnica. En este caso se explicará el Elisa DAS, también conocido como "sándwich de doble anticuerpo".

Método Elisa

En este caso, se requieren los siguientes componentes:

Pocillo dentro de una placa de Elisa

Anticuerpo

Método Elisa

Tras tener los componentes, se requiere añadir el extracto de la muestra obtenida desde la planta analizada.

Anticuerpo

Pocillo dentro de una placa de Elisa

Método Elisa

Si la planta está infectada con un virus, el extracto vendrá con diversas proteínas, en este caso de color azul, rojo y morado.

Método Elisa

En este caso, los anticuerpos detectan solo a las proteínas moradas, porque pertenecen al virus que se busca identificar.

Método Elisa

Por ello, los anticuerpos enganchan a las proteínas moradas en sus "brazos".

Método Elisa

Tras este proceso, se lava la placa Elisa con métodos avanzados, que permiten dejar solo a los anticuerpos con las proteínas moradas, eliminando a las proteínas restantes.

Método Elisa

Tras ello, se añade un nuevo componente que contiene anticuerpos unidos a una enzima reactiva.

Método Elisa

Tras ello, se añade un nuevo componente que contiene anticuerpos unidos a una enzima reactiva.

Enzima reactiva

Método Elisa

Estos anticuerpos con la enzima se adhieren al antígeno, en este caso, a la proteína morada que representa al virus que se busca identificar.

Método Elisa

Si el cultivo no está infectado con el virus, y por tanto no está presente la proteína morada, el anticuerpo marcado con la enzima no se unirá a nada.

Método Elisa

Después, el recipiente deberá ser lavado nuevamente, sin eliminar a los anticuerpos ni sus enzimas.

Método Elisa

Tras el lavado, se añade una sustancia que las enzimas "pintarán" con los sustratos que liberan.

Método Elisa

En este ejemplo, la sustancia cambiará de color indicando que la planta está siendo afectada por la proteína morada de un determinado virus.

Método Elisa

Esta técnica se puede catalogar como cuantitativa.

Método Elisa

Porque el color que adquiera la sustancia reactiva será más o menos fuerte dependiendo de la concentración de proteínas del virus.

Método Elisa

Por tanto, en las placas Elisa, los resultados se verían más o menos así, dependiendo de la concentración de proteínas:

Método Elisa

Esta técnica, al basarse en una reacción anticuerpo, solo podrá utilizarse con agentes infecciosos que tengan proteínas.