présentation PCR

LA PCR :les outils et les étapes

Video de presentation

pour commencer...

une vidéo qui présente le principe de la technique et des précautions pour la manip'

Rappels et principe de la technique

selon les TPs ...

les différentes étapes

extraire l'ADN du matériau étudié

01

amplifier la portion d'ADN d'intérêt

02

digestion enzymatique pour déterminer un génotype

03

séparer et révéler les amplicons et témoins éventuels

04

Première chose à faire

repérer les produits et le matériel

puis organiser le poste de travail

Découvrons le matériel !

le matériel à utiliser

02

Attention 1 marquage des tubes sera nécessaire

03

les tubes avec les solutions à utiliser

01

le thermocycleur

des micropipettes

les solutions

la cuve à électrophorèse

le transilluminateur et la chambre noire

blouse et gants voire masque sont nécessaires

des embouts stériles de taille adaptée et une poubelle à embouts usagés

les solutions sont maintenues au froid

on respecte l'ordre des étapes

des supports divers

une mini centrifugeuse pour éviter le gaspillage

ces supports sont réfrigérés et accueillent 2 types de tubes eppendorff

Les microtubes eppendorff sont ceux qui vont recevoir les mélanges et être placés dans le thermocycleur

les 4 tubes eppendorff sont identifiables par un code couleur

tubes eppendorff

microtubes eppendorff

organiser le plan de travail : pourquoi ?

prendre connaissance des documents : protocole

01

Lors de votre TP :

Identifier l'ADN duquel on va amplifier une séquence

03

l'ADN peut être extrait de ...

... cellules végétales

... cellules épidermiques

ou cellules buccales.

Solutions du kit

repérer le matériel et les solutions à utiliser

02

Le travail pourra être décomposé en 2 séances :

Séance 1

50%

extraction amplification

Séance 2

50%

(digestion)séparationrévélation

Si le cycle d'amplification est trop long il pourra se terminer entre les deux séances de TP

pour déposer les solutions dans les puits

pour mieux repérer les puits on glisse une feuille noire en dessous de la cuve

pour s'assurer que l'électrophorèse à bien démarer, vérifier que vous voyez des bulles remonter vers l'électrode

il faudra être vigilent à l'orientation du gel pour que la migration se fasse vers la borne +

électrophorèse

on pose les coudes sur la table et on guide l'extrémité de la micropipette avec sa main

Quand la migration est terminée ...

Attention il y a un délai entre l'illumination et la fluorescence (10 min environ)là encore une feuille noire en dessous aidera à la visualisation

à vous de jouer !!n'hésitez pas à revoir plusieurs fois cette vidéoet le jour J, ayez bien votre blouse !!